描述

Thermo Scientific™ 组织和培养细胞溶酶体富集试剂盒可从粗细胞和组织提取物中分离和富集完整溶酶体。该试剂盒提供足以制备 25 份提取物的试剂，并使用 OptiPrep 细胞分离基质从污染的细胞结构中对溶酶体进行基于密度的分离。分离的溶酶体可用于多种下游应用，包括用于蛋白质组学研究的 2D/MS、电子显微镜检查、疾病谱分析和基因表达、信号转导以及相互作用或定位。

组织和培养细胞溶酶体富集试剂盒的特点：

?高效且易于使用—试剂盒试剂和梯度离心操作可从污染结构中分离细胞器
? 兼容—制备样品用于下游应用，包括 2D/MS、电子显微镜检查、疾病谱分析、基因表达、信号转导和相互作用或定位研究
? 全套—试剂盒包含足以用于 25 次应用的材料

该试剂盒可从细胞和组织中富集完整细胞器。每个试剂盒使用密度梯度离心操作从杂质细胞结构中分离各种细胞器官。分离出的细胞器可用于多种下游应用，包括 2D/MS、电子显微镜检查、疾病谱分析、基因表达、信号转导和相互作用或定位研究。

组织中的细胞器富集：
处死前，对平均体重为 160 g 的 6 至 8 周龄雌性 Sprague-Dawley 大鼠整夜禁食。切除*和*，用冰冷的 PBS 洗涤，使用手术剪刀进行切碎，然后在冷冰试剂 A 中使用 Polytron™ Tissue Tearer 在 8000 rpm 下进行 45 秒均质处理。随后加入试剂 B，对匀浆离心以去除细胞碎片。将所得的上清液覆盖到不连续梯度的 OptiPrep™ 细胞分离基质上，并离心以分离和富集靶标细胞器。从梯度中取出靶标条带，并采用 Western 印迹进行分析。

细胞中的细胞器富集：
检查了多种细胞系的溶酶体分离：A431 [美国典型培养物保藏中心（ATCC™ 资源中心），#CRL-1555]、HeLa (ATCC, #CCL-2) 和 HepG2 细胞 (ATCC, #HB-8065)。细胞生长至 80-90% 融合。收获并处理约 50-200 mg 湿细胞团用于溶酶体富集。将冰冷的溶酶体试剂 A 添加到细胞中，并使用 Misonix 超声波仪 3000（15 次脉冲，提供 15 W 功率）进行裂解。

随后，添加溶酶体试剂 B，并对匀浆进行离心以去除细胞碎片。将所得的上清液覆盖到不连续梯度的 OptiPrep 细胞分离基质上，并离心以分离和富集靶标细胞器。从梯度中取出靶标条带，连同总裂解物按蛋白量进行标准化（除非另有说明），并采用 Western 印迹进行分析。

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